elisa實驗：常見問題及分析

　　ELISA實驗常見問題及分析

　　1. 背景顏色深/非特異性染色

　　原因?：洗滌不充分、試劑污染、孵育時間過長或抗體濃度過高?。

　　解決方法?：確保洗滌液注滿微孔且無殘留，更換吸頭避免交叉污染，嚴格按說明書控制孵育和顯色時間?。

　　2. 所有孔均無明顯顏色

　　原因?：試劑混淆、酶標物失活或步驟遺漏?。

　　解決方法?：檢查試劑標簽，確認無遺漏步驟，使用新鮮蒸餾水配制緩沖液，確保試劑室溫平衡30分鐘?。

　　3. 假陽性，背景高甚至花板

　　原因?：加樣時污染、溫育箱溫度過高、操作時間過長導致反應時間不同、洗板不充分?。

　　解決方法?：更換槍頭避免污染，控制溫育箱溫度在37±0.5℃，在盡可能短的時間內完成操作，避免堆積板子?。

　　4. 重復性不好

　　原因?：加樣量不一、操作時間不一致、操作人員不同、標本處理不同?。

　　解決方法?：確保加樣量與時間一致，使用同一名操作人員，模擬相同的反應條件?。

　　5. 標準曲線不佳

　　可能原因?：倍比標準品時未充分混勻、標準品溶液配置有誤或標準品已降解?。

　　解決方法?：使用校準過的移液器，快速、等量分配標準品，確認稀釋正確，并按推薦方式保存和處理標準品?。

　　6. 樣本無檢測信號

　　可能原因?：樣本中無檢測物或檢測物含量極低、樣本中其他物質影響/掩蓋檢測、樣本中檢測物濃度過高，Hook效應導致假低值?。

　　解決方法?：設置內參，重新實驗，對樣本進行適當稀釋，降低其他物質的干擾?。

　　7. 陰性對照出現陽性結果

　　可能原因?：試劑/樣品污染、夾心ELISA-檢測抗體與包被抗體反應、酶標板洗板不凈?。

　　解決方法?：使用新鮮試劑，小心操作移液器，確定使用的是正確的包被抗體和檢測抗體?。

　　8. 酶標板整體背景高

　　可能原因?：結合反應太強或時間過長、底物溶液或終止液不是新鮮配制的、沒有終止反應?。

　　解決方法?：檢查底物的稀釋，使用建議的稀釋度，當酶標儀顯色足夠進行吸光度讀取是立即用終止液終止反應?。

　　9. 吸光度數值低

　　可能原因?：使用的樣品中沒有顯示靶蛋白或者靶蛋白顯示的水平低、抗體不足?。

　　解決方法?：檢查靶蛋白表達系統，確保它在您的樣品中被表達出來，確定使用的是建議的抗體量?。

　　10. 吸光值高

　　可能原因?：樣品和/或陽性對照吸光度數高，吸光度沒有按樣品在板上的稀釋梯度遞減?。

　　解決方法?：樣品或陽性對照的濃度過高，超出了實驗方法檢測的范圍，重新設置實驗方法或者在加樣前稀釋降低樣品和對照的濃度?。

　　11. 滿板白，陽性對照不顯色

　　可能原因?：把終止液誤當作酶結合物或底物使用、漏加或錯加試劑?。

　　解決方法?：嚴格按說明書操作，加液時看準標簽，換用合格的蒸餾水或去離子水?。

　　12. 滿板顯色

　　可能原因?：讀板前停留時間過長、加顯色劑后在溫育時受強光或紫外線照射?。

　　解決方法?：加終止液后10分鐘內測定結果，應保存在暗處，避光?。

　　注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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