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ELISA實驗前準(zhǔn)備
ELISA實驗前準(zhǔn)備確實關(guān)鍵,確保你操作時心里有底。實驗前準(zhǔn)備的核心是?試劑平衡、樣本處理、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋和板條準(zhǔn)備?,每一步都需嚴(yán)格按規(guī)范操作,避免因細(xì)節(jié)疏漏影響結(jié)果。
一、試劑平衡與檢查
試劑盒平衡?:從冷藏取出的試劑盒需在室溫(25℃左右)平衡15-30分鐘,避免溫度波動影響活性。
洗滌液處理?:若濃縮洗滌液有結(jié)晶,可在37℃水浴中加溫助溶,稀釋后不影響結(jié)果。
試劑保存?:底物需避光保存,封板膜僅一次性使用,酶標(biāo)包被板開封后未用完的板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
二、樣本與標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備
樣本處理?:新鮮標(biāo)本應(yīng)盡早檢測,若需長期保存需分裝后儲存在-20℃或-80℃,避免反復(fù)凍融。若樣本中待測物質(zhì)含量過高(OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品高孔),需用樣品稀釋液稀釋n倍后測定,計算時需乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:按說明書要求梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,推薦設(shè)置6個濃度梯度(如640pg/ml、320pg/ml、160pg/ml、80pg/ml、40pg/ml、0pg/ml),每個濃度做復(fù)孔以減少誤差。
三、板條準(zhǔn)備
從鋁箔袋中取出所需板條后,立即將剩余板條與干燥劑一起重新密封保存,防止受潮。
將板條穩(wěn)固地放置于板架上,避免因板條放置不穩(wěn)導(dǎo)致加樣誤差。
四、其他注意事項
試劑復(fù)溫與平衡?:
所有試劑(包括檢測抗體、酶結(jié)合物、顯色液、標(biāo)準(zhǔn)品等)從冰箱取出,室溫(20-25°C)平衡至少20分鐘。過冷的試劑會導(dǎo)致吸光度值偏低、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳,并可能因冷凝造成孔內(nèi)液體濃度變化。
試劑配制?:
嚴(yán)格按照說明書配制洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)品等。洗滌液若為濃縮液,需使用超純水或蒸餾水準(zhǔn)確稀釋,確保pH和離子強度正確,避免結(jié)晶或污染。
注:以上僅供參考,本產(chǎn)品僅供科研使用,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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