小鼠α谷胱甘肽S轉移酶(α-GST)ELISA試劑盒實驗說明書

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測小鼠α-GST水平。預包被抗體的微孔板捕獲樣本中的α-GST，加入生物素標記的二抗形成復合物，再通過SABC-辣根過氧化物酶系統顯色。顯色強度與α-GST濃度成正比，450nm波長下測定OD值，通過標準曲線計算樣本濃度。

　　二、試劑盒組成

　　組分48T規格96T規格保存條件

　　預包被酶標板8×6條8×12條2-8℃密封

　　標準品6管(0-24 U/L)6管(0-24 U/L)2-8℃

　　生物素化檢測抗體60μL(100×)120μL(100×)-20℃

　　TMB顯色液各3mL(A/B液)各6mL(A/B液)避光

　　終止液6mL12mL室溫

　　20×濃縮洗滌液30mL60mL室溫

　　三、實驗步驟

　　樣本處理

　　血清/血漿：采集后離心(3000rpm, 10min)，避免溶血，2-8℃保存48小時或-80℃長期保存。

　　組織勻漿：按0.1g組織加1mL PBS比例冰浴勻漿，離心取上清，稀釋50倍后檢測。

　　檢測流程

　　加樣：每孔加入100μL標準品/樣本，37℃孵育90分鐘。

　　洗滌：棄液后拍干，每孔加洗滌液200μL，重復3次。

　　顯色：加入100μL酶標抗體，37℃孵育30分鐘，加TMB底物避光反應15分鐘。

　　終止：每孔加50μL終止液，30分鐘內測定OD值。

　　四、數據分析

　　標準曲線繪制：以標準品濃度(U/L)為橫坐標，OD值為縱坐標擬合四參數曲線。

　　樣本計算：根據標準曲線公式計算α-GST濃度，組織樣本需乘以稀釋倍數(如50倍)。

　　五、注意事項

　　樣本要求：避免反復凍融，高脂樣本需離心去除懸浮物。

　　溫度控制：反應全程保持37℃，顯色避光防淬滅。

　　安全操作：TMB底物具腐蝕性，需佩戴手套操作。

　　數據驗證：建議設置復孔，OD值超出標準曲線范圍時需稀釋重測。

　　注意：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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